Método colorimétrico - uma análise baseada na comparação da saturação de cor das substâncias investigadas e conhecidas. Os resultados dos testes físicos e químicos são de grande valor para muitos ramos da ciência, mas a maioria das pesquisas é usada na medicina.
A essência do método colorimétrico
Existem muitos tipos de testes que determinam a composição química das substâncias. Alguns deles são universais e amplamente utilizados em diversos campos, outros são específicos, com maior precisão. O método colorimétrico é universal.
A essência da análise reside no fato de que a saturação de cor de uma solução com concentração desconhecida é comparada com a cor de uma solução padrão. Durante a análise, como resultado da interação do componente investigado com um determinado reagente, forma-se um composto colorido. Após a conclusão da reação, a tonalidade resultante é comparada com a cor das soluções, cuja concentração já é conhecida.
Acredita-se que o fundador da colorimetria seja Robert Boyle. Ele usou apertotaninos para distinguir o ferro do cobre em solução. Foi Boyle quem notou que quanto maior a concentração de ferro na solução, mais rico o tom desta última.
Colorimetria
Colorimetria é um método para determinar a quantidade de uma substância em soluções. A análise é baseada na lei de Bouguer-Lambert-Beer: quando um feixe de luz atinge uma densa camada absorvente de uma substância, sua intensidade enfraquece.
O método colorimétrico para determinar a concentração de uma substância pode usar uma comparação visual ou comparação usando instrumentos especiais para medir a intensidade da cor. A comparação é feita de forma direta e compensatória.
- Reto. O método envolve a comparação do nível de cor da solução de teste em uma certa densidade e temperatura do líquido com uma solução de referência. Ao usar fotocolorímetros e espectrofotômetros, a água destilada é usada como solução de referência. Os aparelhos medem a intensidade da corrente, que depende da intensidade da luz.
- Compensatório. O método baseia-se em trazer a cor da amostra estudada para a de referência. O resultado é obtido adicionando um solvente ou aumentando a altura da camada do meio corado.
O uso de espectrofotômetro, monocromador e outros instrumentos de precisão simplifica ainda mais o já simples método de pesquisa e permite aumentar a precisão dos resultados. Esses dispositivos são capazes de medir a quantidade de transmissão de luz e determinar o comprimento de onda.
Onde a análise é aplicada
O método colorimétrico de análise é usado quando a composição química exata é conhecida, há uma amostra de referência para comparação e a temperatura da amostra de teste e de referência é a mesma. Se você precisa determinar rapidamente a quantidade de uma substância colorida, mas é tão pequena que é impossível aplicar o método analítico.
A colorimetria é amplamente utilizada na medicina para pesquisas bioquímicas clínicas e outras áreas:
- indústria farmacêutica;
- indústria de alimentos e álcool;
- agronomia (determinação da qualidade do solo).
Prós e contras
O método colorimétrico, como qualquer outro, tem prós e contras.
As vantagens incluem o seguinte:
- facilidade de análise, procedimentos preparatórios mínimos;
- possibilidade de testar mesmo com uma pequena quantidade de material de teste;
- não há necessidade de equipamentos caros, embora dispositivos modernos que não são baratos tenham sido cada vez mais usados ultimamente. Mas eles fornecem o resultado mais preciso.
Desvantagens: baixa precisão da análise em relação aos métodos analíticos.
Método de biureto para determinação de proteínas
Proteína no soro sanguíneo é um indicador que reflete o estado de homeostase. Um aumento na concentração de um composto macromolecular no sangue é chamado de hiperproteinemia, um baixo teor é chamado de hipoproteinemia.
Proteínas emsoro sanguíneo têm uma composição diferente, estrutura, propriedades, desempenham funções diferentes. Eles são divididos em enzimas, hormônios, imunoglobulinas e outros. Todos os grupos de proteínas têm uma série de características comuns, com base nas quais foram desenvolvidos métodos para a determinação de compostos orgânicos macromoleculares em fluidos biológicos.
De todos os métodos em bioquímica clínica, os métodos colorimétricos para determinação de proteínas são os mais usados. Eles são relativamente baratos, o que é importante para organizações de orçamento. e são bastante simples. O mais comum é o método do biureto. A essência do método: proteínas em um ambiente alcalino reagem com sulfato de cobre e formam compostos roxos. O teor de proteína no sangue é determinado pela saturação da coloração. O biomaterial para análise é coletado pela manhã com o estômago vazio.
A análise é altamente precisa, mas existem fatores que afetam a concentração de proteína no sangue:
- atividade física pouco antes da amostragem do biomaterial;
- últimas semanas de gravidez e lactação;
- o uso das drogas Corticotropina, Miscleron, Clofibrato aumenta o teor de proteína no sangue, e o uso de pirazinamida e estrogênio - para reduzir a concentração;
- posição errada da mão durante a amostragem do biomaterial.
Determinação do ferro
A quantidade de ferro no sangue é um dos principais indicadores no diagnóstico de diversas doenças. A substância é concentrada na hemoglobina, que garante o transporte de oxigênio para os tecidos. Pordeterminação de ferro pelo método colorimétrico, na maioria das vezes, uma solução de batofenantrolina (0,02%) é usada como reagente principal. Biomaterial - soro sem traços de hemólise.
A essência do método: a interação de íons ferrosos e batofenantrolina sulfatada forma um complexo colorido, cuja saturação é determinada fotometricamente. Para obter uma solução límpida, é necessário seguir as regras de amostragem do biomaterial, mas para determinar com precisão as densidades ópticas dos complexos ferro-ligante, o ferro é liberado da hemoglobina usando hidroxilamina e detergentes (dodecil sulfato de sódio). O resultado do teste determina a presença e o grau de patologia. A concentração normal de ferro deve ser:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (homens);
- 10, 6-21, 7 µmol/L (mulheres).
A deficiência de ferro geralmente está associada à perda de sangue, ingestão inadequada de alimentos ou má absorção pelo trato gastrointestinal.
Teste de colesterol
O colesterol é uma substância orgânica encontrada na parede celular de muitos organismos, incluindo humanos. É necessário para a produção de colecalciferol e hormônios esteróides. Um nível de colesterol de 3,37-5,2 mmol/L é considerado normal. O conteúdo elevado é uma das principais causas da aterosclerose.
Os métodos colorimétricos para determinar o colesterol permitem que você reconheça as doenças vasculares em um estágio inicial. De acordo com os resultados anatomopatológicos no desfecho letal da isquemia, a concentração de álcool lipofílico em pacientesfoi 6,5-7,8 mmol/L.
O princípio do método colorimétrico é que o colesterol é oxidado pela 3beta-hidroxi-esteróide oxidorredutase, liberando peróxido de hidrogênio, que converte a p-aminoatipirina em um composto colorido. O conteúdo de colesterol é determinado pela saturação de sua cor.
Ao realizar um teste em uma criança, deve-se levar em consideração que a concentração de colesterol na infância não deve exceder 4,1 mmol / l.
O que é o método colorimétrico enzimático?
Os testes enzimáticos são baseados no uso de reações por enzimas com alta atividade. Eles são amplamente utilizados em química analítica para determinar várias substâncias - de íons de nitrato a macromoléculas.
Os métodos enzimáticos (enzimáticos) são específicos, permitindo a análise de determinadas substâncias na presença de outras substâncias de composição semelhante. Os métodos mais comuns baseados no uso da enzima - glicose oxidase. O teste é usado para determinar a concentração de glicose no sangue. A precisão do teste permite que ele seja usado para ajustar a dosagem de hipoglicemiantes em pacientes com diabetes tipo 2.
O método oxidante da glicose é considerado um dos melhores métodos quantitativos para a determinação da glicose. Tanto o sangue (capilar) quanto o soro podem ser usados como biomaterial, mas o plasma é mais preferível, pois possui menor teor de hematócrito, o que afeta negativamente a precisão do resultado.
O método cinético de fotometria é usado principalmente. Sua essência reside no fato de quea relação estabelecida de glicose oxidase e peroxidase, por um certo período de tempo após o início da reação, a taxa de formação de um composto colorido será proporcional ao nível de glicose na amostra. A principal vantagem do teste é que o resultado não é afetado pela presença de compostos de terceiros na amostra. O método também tem uma desvantagem - instrumentos de medição caros de fabricantes alemães ou suecos são necessários para o teste.
Conclusão
O método colorimétrico é preciso e fácil de usar. Seu uso na medicina permite a detecção precoce de várias alterações patológicas no corpo. Com a introdução de novas tecnologias, o método está sendo aprimorado e está se tornando cada vez mais popular.
