Recentemente, foi desenvolvido um método confiável, altamente sensível e rápido para diagnosticar várias doenças infecciosas humanas. Este método é chamado de "análise de PCR". O que é, qual é a sua essência, quais microorganismos pode revelar e como tomá-lo corretamente, contaremos em nosso artigo.
Histórico de descobertas
Inventou o método de reação em cadeia da polimerase (PCR) pelo cientista americano Kary Mullis em 1983. Inicialmente, o método diagnóstico foi patenteado pela Cetus Corporation, na qual seu criador trabalhava. Mas em 1992, todos os direitos e patentes foram vendidos à Hoffman-La Roche. Depois disso, descobriu-se que estudos semelhantes foram realizados em paralelo e foram registrados por outros biólogos americanos, como Alice Chen, David Edgar, John Trell. Em 1980, os cientistas soviéticos A. Slyusarenko, A. Kaledin e S. Gorodetsky também lidaram com esse problema. Portanto, era impossível determinar o único detentor dos direitos autorais. Muitos bioquímicos proeminentes deram uma certa contribuição para o desenvolvimento da técnica de reação em cadeia da polimerase e patentearam suas inovações. Atualmente, a análiseA PCR é realizada em todos os lugares em laboratórios especialmente equipados.
A essência do método de diagnóstico PCR
Análise PCR: o que é e como funciona? A essência do método é aumentar o volume de um determinado ambiente microbiano sob condições artificiais usando uma enzima especial de DNA polimerase. Para isso, o material de DNA existente é multiplicado muitas vezes. Assim, na presença de um microrganismo patogênico na amostra, sua quantidade será aumentada devido a manipulações laboratoriais bioquímicas, e não será difícil detectar a bactéria ao microscópio.
Como é feita a pesquisa de materiais?
Requerido para análise:
- matriz de DNA;
- primers conectando as extremidades de um pedaço de material;
- enzima polimerase de DNA resistente ao calor;
- produtos químicos que fazem as enzimas funcionarem corretamente;
- solução tampão necessária para criar as condições adequadas para o crescimento e desenvolvimento do material de DNA.
Para realizar a PCR, são realizadas 25-30 repetições, compostas por três etapas: desnaturação, anelamento e alongamento.
Para a análise da reação em cadeia do polímero, é usado um dispositivo especial - um amplificador. Equipamentos modernos permitem que você defina o programa necessário para tubos de aquecimento e resfriamento para eliminar erros durante o diagnóstico.
Onde o diagnóstico é usado?
O método de reação em cadeia do polímero é usado em vários campos da medicina:
- criminosos comidentifica material genético como cabelo, saliva ou sangue;
- O exame de sangue PCR ajuda na genotipagem, por exemplo, para detectar uma reação individual geneticamente inerente a uma determinada droga;
- utilizando este método para estabelecer a presença de laços familiares entre as pessoas;
- O método de PCR mais popular tornou-se no diagnóstico médico para determinar várias doenças infecciosas.
Quais infecções o PCR detecta?
Assim, a medicina tem usado a análise PCR há muito tempo e com sucesso. O que é, já sabemos. E quais patógenos podem ser detectados com ele? As seguintes doenças infecciosas são diagnosticadas pelo método PCR:
- hepatite A, B, C;
- ureaplasmosis;
- candidíase;
- chlamydia;
- micoplasmose;
- gardnerelose;
- mononucleose infecciosa;
- tricomoníase;
- infecção por papilomavírus;
- tuberculose;
- infecção por herpes tipos 1 e 2;
- helicobacteriose;
- citomegalovírus;
- difteria;
- salmonelose;
- Infecção pelo HIV.
Além disso, métodos de PCR são usados no diagnóstico de câncer.
Benefícios do método
O diagnóstico de PCR tem várias vantagens:
- Alta sensibilidade. Mesmo na presença de apenas algumas moléculas de DNA do microrganismo, a análise de PCR determina a presença de infecção. O método ajudará com doenças crônicas e latentes. Muitas vezes, nesses casos, o microrganismoé incultivável.
- Qualquer material é adequado para pesquisa, como saliva, sangue, secreções genitais, cabelos, células epiteliais. O mais comum é a análise de sangue e esfregaço urogenital para PCR.
- Nenhuma colheita de longo prazo necessária. O processo de diagnóstico automatizado permite que você obtenha os resultados do estudo após 4-5 horas.
- O método é quase 100% confiável. Apenas casos isolados de resultados falsos negativos foram registrados.
- A capacidade de identificar vários tipos de patógenos a partir de uma única amostra de material. Isso não apenas acelera o processo de diagnóstico da doença, mas também reduz significativamente os custos de material. Muitas vezes, o médico prescreve uma análise PCR abrangente. O preço do exame, que consiste na determinação de seis patógenos, é de cerca de 1.500 rublos.
Recomendações para preparação para análise
Para que os resultados sejam confiáveis durante o estudo de PCR, você precisa fazer o teste, seguindo as recomendações de preparação preliminar para o diagnóstico:
- Antes de doar saliva, você deve se abster de comer e tomar medicamentos 4 horas antes da amostragem. Imediatamente antes do procedimento, lave a boca com água fervida.
- As regras acima também devem ser seguidas ao coletar uma amostra da superfície interna da bochecha. Após o enxágue, recomenda-se realizar uma leve massagem na pele para realçar a secreção da glândula.
- Urina geralmente é coletada em casa. Para fazer isso, você precisa realizar um banheiro completoórgãos genitais. Colete 50-60 ml de urina em um recipiente plástico estéril. Para garantir a pureza do material, recomenda-se que as mulheres insiram um tampão na vagina e que os homens puxem a dobra da pele o máximo possível. Não doe durante a menstruação.
- Para doar esperma, você deve abster-se de relações sexuais por 3 dias antes da amostragem. Os médicos também desaconselham ir à sauna e tomar banho quente, beber álcool e comida picante. Você deve evitar urinar 3 horas antes do teste.
- Para fazer um esfregaço urogenital, por exemplo, se um teste de PCR for realizado para clamídia, tanto as mulheres quanto os homens são aconselhados a fazer repouso sexual por 3 dias. Medicamentos antibacterianos não devem ser tomados 2 semanas antes da análise. Por uma semana, você precisa parar de usar géis íntimos, pomadas, supositórios vaginais, duchas. 3 horas antes do exame, você deve evitar urinar. Durante a menstruação, a amostragem não é realizada, apenas 3 dias após a interrupção da descarga de sangue, você pode fazer um esfregaço urogenital.
PCR durante a gravidez
Durante o período de expectativa do bebê, muitas infecções sexualmente transmissíveis são extremamente perigosas para o desenvolvimento normal do feto. As DSTs podem provocar retardo de crescimento intrauterino, aborto espontâneo ou parto prematuro, malformações congênitas da criança. Portanto, é extremamente importante realizar um exame de PCR no início da gravidez. É necessário passar na análise no ato da inscrição - até 12 semanas.
O material é retirado do canal cervical com uma escova especial. O procedimento é indolor e não representa perigo para o bebê. Geralmente durante a gravidez, é realizada uma análise para clamídia pelo método PCR, bem como para ureaplasmose, micoplasmose, citomegalovírus, herpes, papilomavírus. Tal complexo de exames é chamado de PCR-6.
PCR para diagnóstico de HIV
Devido ao fato de que o método de reação em cadeia da polimerase é muito sensível às alterações no organismo e às condições do diagnóstico, muitos fatores podem afetar o resultado. Portanto, a análise de PCR para infecção pelo HIV não é um método confiável, sua eficiência é de 96 a 98%. Nos restantes 2-4% dos casos, o teste dá resultados falsos positivos.
Mas em algumas situações, o diagnóstico de HIV PCR é indispensável. Geralmente é administrado a pessoas com resultado ELISA falso-negativo. Esses indicadores indicam que uma pessoa ainda não desenvolveu anticorpos para o vírus e não podem ser detectados sem um aumento múltiplo no número. Isso é exatamente o que pode ser alcançado através da realização de um exame de sangue PCR.
Estes diagnósticos também são necessários para crianças do primeiro ano de vida nascidas de mãe soropositiva. O método é a única maneira de determinar com segurança o status de uma criança.
PCR para diagnóstico de hepatite
O método de reação em cadeia da polimerase permite detectar o DNA do vírus da hepatite A, B, C muito antes da formação de anticorpos contra a infecção ou do início dos sintomas da doença. A análise de PCR para hepatite C é especialmente eficaz, pois em 85% dos casos esta doença é assintomática e semo tratamento oportuno entra na fase crônica.
A detecção oportuna do patógeno ajudará a evitar complicações e tratamento a longo prazo.
Exame PCR abrangente
Análise PCR complexa: o que é? Trata-se de um exame pelo método de reação em cadeia polimérica, que inclui a determinação de vários tipos de infecções simultaneamente: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovírus, ureaplasma urealiticum, herpes tipos 1 e 2, gonorreia, papilomavírus. O preço de tais diagnósticos varia de 2.000 a 3.500 rublos. dependendo da clínica, dos materiais e equipamentos utilizados, bem como do tipo de análise: qualitativa ou quantitativa. O que é necessário no seu caso - o médico decidirá. Em alguns casos, basta determinar a presença do patógeno, em outros, por exemplo, com infecção pelo HIV, um título quantitativo desempenha um papel importante. Ao diagnosticar todos os patógenos acima, o exame é chamado de "análise PCR-12".
Transcrição dos resultados da análise
Decifrar a análise de PCR não é difícil. Existem apenas 2 escalas do indicador - "resultado positivo" e "resultado negativo". Quando um patógeno é detectado, os médicos podem confirmar a presença da doença com 99% de certeza e começar a tratar o paciente. Com um método quantitativo para determinar a infecção, a coluna correspondente indicará o indicador numérico das bactérias detectadas. Somente um médico pode determinar a extensão da doença e prescrever o tratamento necessário.
Em alguns casos, por exemplo, ao determinar a infecção pelo HIV por PCR, com resultado negativo, torna-se necessário realizar exames complementares para confirmar os indicadores obtidos.
Onde fazer o teste?
Onde fazer um teste de PCR: em uma clínica pública ou em um laboratório privado? Infelizmente, nas instituições médicas municipais, os equipamentos e métodos costumam estar desatualizados. Portanto, é melhor dar preferência a laboratórios privados com equipamentos modernos e pessoal altamente qualificado. Além disso, em uma clínica particular, você terá resultados muito mais rápidos.
Em Moscou, muitos laboratórios particulares oferecem análises de PCR para várias infecções. Por exemplo, em clínicas como Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, a análise PCR é realizada. O preço do exame é de 200 rublos. para identificar um patógeno.
Pode-se concluir que o diagnóstico de doenças infecciosas por PCR na maioria dos casos é uma forma rápida e confiável de detectar o patógeno no organismo nos estágios iniciais da infecção. Mas ainda assim, em certos casos, vale a pena escolher outros métodos de diagnóstico. Somente um especialista pode determinar a necessidade de tal estudo. Decifrar a análise de PCR também requer uma abordagem profissional. Siga o conselho do seu médico e não faça exames desnecessários.
