Hepatite C é uma infecção do fígado causada pelo vírus Flaviviridae HCV, que consiste em uma ou mais moléculas de RNA. Como regra, uma série de medidas diagnósticas são tomadas para estabelecer a hepatite C em um paciente. A PCR é uma análise que confirma com precisão o diagnóstico. Muitas vezes a conclusão é dada pelos médicos quando o paciente já apresenta os primeiros sinais da doença.
O que é hepatite C
O dano hepático por uma infecção viral transmitida pelo sangue ou por contato sexual é chamado na medicina de hepatite C. O agente causador é um vírus contendo RNA de agentes infecciosos não celulares da família Flaviviridae. A infecção pode permanecer no corpo por muito tempo sem se manifestar. Portanto, somente quando um microrganismo é detectado por meio de um exame de sangue usando PCR RNA RNA, a hepatite C (como diagnóstico) é considerada justificada.
Flavivírus não é produzido em células isoladas cultivadas artificialmente. No processo de reprodução, o agente infeccioso cria modificações imunologicamente distintas. Esses fatores impedem o corpo de darresposta protetora apropriada, e os especialistas estão tendo dificuldade em desenvolver uma vacina eficaz.
O vírus é transmitido por via parenteral. Para infecção, deve entrar em quantidades suficientes diretamente na corrente sanguínea.
Quais exames são feitos para hepatite C
As patologias virais do fígado são diagnosticadas através de exames laboratoriais. Os estudos clínicos da hepatite C são realizados através do estudo de antígenos ou compostos proteicos estranhos e perigosos (anticorpos) no biomaterial do paciente, principalmente no sangue.
- Imunoensaio enzimático (ELISA). O método baseia-se na detecção de anticorpos lgM no sangue. A imunoglobulina é considerada a maior e é um pentâmero. Manifesta-se na resposta protetora primária dos linfócitos a uma substância estranha desconhecida.
- Radioimunoensaio (RIA) - determinação quantitativa de imunoglobulina lgM usando um isótopo radioativo marcado de iodo.
- PCR da hepatite C - determinação do RNA viral no biomaterial (sangue). Esta análise confirma o diagnóstico de forma confiável.
O teste de IgG não é confiável. Sua presença no soro sanguíneo pode indicar não apenas a presença de um flavivírus, mas também outra infecção passada que tenha o mesmo patógeno.
O que determina a análise de PCR
A reação em cadeia da polimerase (PCR) é baseada na identificação de regiões de DNA específicas para determinados patógenos em amostras de material para pesquisa (epitélio, sangue). A análise permite identificar os menores organismos patogênicos (vírus) detectando seu RNA ou DNA em material biológico.
Procedimento laboratorial para detecção de anticorpos Hepatite C PCR é realizado em 3 etapas:
- Selecione. O biomaterial estudado é purificado das impurezas e o DNA é obtido na fase móvel da coluna cromatográfica.
- Amplificação. A análise é realizada no ciclador do termostato do dispositivo. Aquece e resfria os tubos de ensaio com uma certa ciclicidade. Para um estudo, são realizados até 35 ciclos. O resultado é um número suficiente de fragmentos de DNA para detectar, identificar e avaliar o patógeno.
- Eletroforese. Os fragmentos resultantes são colocados em um gel com diferentes saturações de agarose e a eletroforese é realizada. O eletroferograma resultante é analisado em um computador.
Não é usado apenas o estudo de PCR padrão, mas também a análise de PCR em tempo real. Este é o diagnóstico em tempo real. O método permite análises qualitativas e quantitativas, o que possibilita identificar a formação e a dinâmica da doença, bem como prescrever terapias visando eliminar a causa da origem da patologia. A PCR em tempo real também é usada para determinar uma cultura pura de agentes infecciosos (genotipagem).
Como é feito o teste de reação em cadeia da polimerase
Para diagnóstico, qualquer fluido biológico humano pode ser usado. O biomaterial para teste de hepatite C geralmente é sangue.
A amostragem para diagnóstico é realizada no procedimentoescritório. Para tirar sangue, use tubos de ensaio descartáveis com uma substância que inibe a coagulação do sangue. As atividades focadas na prevenção da disseminação de agentes infecciosos ajudam a evitar a entrada de outra cepa de microorganismos de fora.
O sangue para PCR da hepatite C é coletado pela manhã com o estômago vazio. A amostra é enviada imediatamente para o laboratório. É permitido armazenar o biomaterial a uma temperatura de +4 a +8 graus Celsius. Os recipientes são rotulados e fornecidos com instruções. Os resultados dos testes ficam disponíveis em 48 horas, às vezes antes.
Tipos de PCR
A gama de aplicação da reação em cadeia da polimerase é bastante ampla. Os infectologistas determinam usando PCR hepatite B, doenças transmitidas por insetos sugadores de sangue, AIDS, tuberculose. Na oncologia, usando esse método, as células tumorais são detectadas em um estágio inicial.
Existem cerca de quatorze tipos de análise. A utilização de um ou outro tipo depende do escopo e dos resultados finais das análises. Alguns tipos de PCR são indispensáveis onde o resultado é necessário em 20 minutos.
Para diagnosticar a hepatite C, são utilizados 3 tipos de reação em cadeia da polimerase:
- A avaliação qualitativa pode ser positiva, indicando a presença de uma infecção no organismo, ou negativa, indicando a ausência de um flavivírus.
- PCR em tempo real (análise quantitativa) - determina o RNA quantitativo do patógeno em UI/ml.
- Genotipagem é uma análise que revela o tipo (genótipo) do vírus.
Para identificar e determinar com precisão a doença, seguido portodos os três tipos de estudos são usados para prescrever a terapia ideal.
Análise qualitativa da reação em cadeia da polimerase
Uma análise é obrigatória para todos que têm um ELISA que detectou anticorpos para HCV. A PCR qualitativa para hepatite C é o teste de suscetibilidade padrão. O método visa apenas a detecção, não é realizada contagem ou isolamento de outras substâncias.
Para detectar anticorpos, sistemas de teste especiais são usados com um limite de sensibilidade de pelo menos 50 UI/ml. Se forem detectados anticorpos, outros testes de esclarecimento são prescritos. Se o resultado for negativo, nenhum teste adicional será feito.
Em alguns casos, um resultado falso negativo pode ser devido a uma equipe de laboratório incompetente ou reagentes de baixa qualidade. Para o seguro, é melhor refazer a análise em outro lugar.
PCR quantitativa
O método é usado para estudar diretamente o número de flavivírus em um ciclo de reação. Para uma medição precisa, são usados fragmentos de DNA usados para hibridização ou primers marcados com fluorescência. Existe uma opção de detecção econômica usando o corante SYBL Green. O corante é encaixado em um pequeno sulco no DNA e fica azul quando irradiado com um laser.
A concentração é determinada pelo aparelho-amplificador em equivalente digital. Os valores podem variar um pouco entre os laboratórios e, portanto, devem ser comparados com os valores de referência.
PCR quantitativohepatite C ajuda a escolher a dosagem ideal de medicamentos e determinar a duração da terapia. A frequência do estudo depende do estágio da doença, do tipo de genótipo e do curso de tratamento prescrito.
Determinação do genótipo
O vírus da hepatite C tem uma composição genética variável. Inúmeras modificações impossibilitam a criação de uma vacina e também complicam a terapia. Um total de 11 genótipos e 100 subtipos foram identificados e registrados. Nos países da antiga URSS, em pessoas infectadas com hepatite C, a PCR detecta principalmente os genótipos 1b e 3.
Na presença de qualquer um dos genótipos, cirrose ou câncer de fígado podem se divertir. É por isso que é tão importante detectar o vírus a tempo.
Para alguns pacientes, certos medicamentos destinados a combater o HCV são tóxicos. A genotipagem permite determinar o tipo de proteína e prescrever um medicamento eficaz.
Nos resultados dos testes de digitação há um número com uma letra latina minúscula indicando o genótipo do vírus. Se o HCV for detectado, mas não tipado, isso significa que a pessoa tem um genótipo que não é típico de uma determinada área geográfica.
Resultados da análise
O médico trata de decifrar os resultados. Apenas os dados de vários estudos (juntamente com anamnese e exame) podem dar uma visão geral real do histórico médico.
- Em uma pessoa saudável, um teste de reação qualitativa no biomaterial não detecta nada. Se for indicado o valor "detectado", a infecção é confirmada e o pacienteprecisa de mais diagnóstico seguido de tratamento.
- A determinação do número de agentes infecciosos permite avaliar a carga viral no organismo. Normalmente, a PCR quantitativa da hepatite C não detecta o patógeno. Um indicador de até 810^5 é considerado uma carga baixa e, com terapia adequada, garante um resultado favorável. Valores mais altos exigem exame aprofundado e determinação de terapia de longo prazo, cujo resultado positivo ninguém pode garantir.
- Os resultados de genotipagem positivos indicam qual genótipo é reconhecido. Um resultado negativo indica a ausência de um flavivírus ou a presença de um genótipo que não é típico para esta região.
O que indica um teste PCR positivo
Qualquer doença grave requer um diagnóstico abrangente. Uma PCR positiva para hepatite C confirma o diagnóstico, mas as previsões só podem ser feitas após estudos laboratoriais e instrumentais adicionais.
A detecção de um vírus não fornece um quadro completo da patologia. É necessário identificar seu tipo e natureza, para determinar como isso afeta o fígado e outros órgãos. A detecção precoce do HCV geralmente tem um resultado terapêutico favorável.
PCR negativo com ELISA positivo
Ao observar os sintomas característicos de lesão hepática, há uma grande probabilidade de que a infecção já tenha entrado no corpo. Portanto, você deve entrar em contato com um hepatologista ou especialista em doenças infecciosas. Durante as entrevistas, o especialista fará a anamnese e prescreverá o exame necessário.
Seos resultados dos estudos sobre a PCR da hepatite C são negativos e o imunoensaio enzimático é positivo, o que indica a presença de anticorpos para o flavivírus no sangue. Isso geralmente acontece quando a infecção entra no corpo em pequena quantidade, então o sistema imunológico lida com isso por conta própria. Mas essas pessoas ainda são consideradas infectadas e devem ser examinadas a cada 6 meses. Se, com esses resultados de teste, for negado a uma pessoa um exame médico gratuito, é melhor fazer uma PCR pagando uma taxa para manter a saúde e, se os resultados forem positivos, entre em contato com um especialista para diagnóstico e tratamento.
Vantagens e desvantagens do método
Ao estabelecer o diagnóstico de hepatite C, a PCR apresenta várias vantagens:
- Detecção precoce de patógeno.
- Definição precisa do vírus.
- Eficiência do diagnóstico.
- Taxa de erro mínima.
- Alta sensibilidade.
Desvantagens do método:
- Alto custo de análise. O teste requer equipamentos caros, reagentes e equipe médica altamente qualificada. Todos juntos somam uma quantidade considerável.
- Requisitos rigorosos para o transporte de biomaterial.
Tratamento da inflamação do fígado
A análise por PCR para o vírus da hepatite C é considerada fundamental para o diagnóstico, mas não definitiva. Para que a terapia seja eficaz, são necessários vários estudos laboratoriais e instrumentais adicionais. Depois de passar todosmedidas de diagnóstico o médico prescreve o tratamento:
- Dieta 5 é prescrita.
- Álcool é completamente excluído.
- Recepção conjunta de Interferon e Ribavirina por 25 dias.
- Cursos de hepaprotetores "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- Em casos especiais, a plasmaférese discreta é usada.
Medicamentos prescritos por hepatologista são usados regularmente, sem alterar a dosagem. A duração do uso dos medicamentos é determinada pelo médico após passar nos testes de controle. Após completar o curso da terapia, você deve visitar o médico a cada seis meses.
PCR-diagnostics permite identificar o agente causador da hepatite C em um estágio inicial. Isso contribui para a eficácia da terapia e a prevenção da transição da doença para formas tão perigosas como cirrose e carcinoma hepatocelular.
