O estudo das bactérias é de grande importância prática para os seres humanos. Até o momento, foi descoberto um grande número de procariontes, que diferem entre si em patogenicidade, área de distribuição, forma, tamanho, número de flagelos e outros parâmetros. Para estudar esta cepa em detalhes, um método de pesquisa bacteriológica é usado.
Quais são os métodos para analisar células bacterianas?
Para determinar se as bactérias são patogênicas, a cultura é examinada de várias maneiras. Entre eles:
1. Método bacterioscópico.
2. Método bacteriológico.
3. Método biológico.
Os métodos de pesquisa bacterioscópica e bacteriológica baseiam-se diretamente no trabalho com células procarióticas, quando a análise biológica é necessária para estudar o efeito dessas células no organismo vivo de animais experimentais. De acordo com o grau de manifestação de certos sinais da doença, o cientista pode fazerconclusão sobre a presença ou ausência de bactérias patogênicas na amostra, bem como propagá-las naturalmente no corpo do animal para obter sua cultura e utilização em outros trabalhos.
O método bacteriológico de pesquisa difere do bacterioscópico. No primeiro, uma cultura especialmente preparada de procariontes vivos é usada para análise, enquanto no segundo, o trabalho é realizado com células mortas ou vivas em uma lâmina de vidro.
Etapas do método de pesquisa bacteriológica. Microbiologia
O princípio de estudar as propriedades de uma cultura bacteriana pode ser útil tanto para microbiologistas que estabeleceram o objetivo de estudar células procarióticas, quanto para técnicos de laboratório cuja tarefa é estabelecer a patogenicidade ou não patogenicidade de bactérias, e então diagnostique o paciente.
O método de estudo das bactérias é dividido em três etapas:
1. Isolamento de bactérias da amostra original.
2. Semeando bactérias e cultivando uma cultura pura, estudando suas propriedades.
3. Estudo detalhado de células bacterianas.
Primeira etapa
A amostra, ou esfregaço, é retirada da superfície livre do meio ou do paciente. Assim, obtemos um "coquetel" de muitos tipos de bactérias que devem ser semeadas em meio nutriente. Às vezes torna-se possível isolar imediatamente as bactérias necessárias, conhecendo seus focos de distribuição no corpo.
Após dois ou três dias, as colônias desejadas são selecionadas esão semeadas em meios sólidos de placas de Petri com a ajuda de uma alça estéril. Muitos laboratórios trabalham com tubos de ensaio, que podem conter meios nutrientes sólidos ou líquidos. Assim é realizado o método bacteriológico de pesquisa em microbiologia.
Segunda etapa
Após a obtenção de colônias individuais de bactérias, é realizada uma macro e microanálise direta. Todos os parâmetros das colônias são medidos, a cor e a forma de cada uma delas são determinadas. Não é incomum contar colônias em uma placa de Petri e depois no material de partida. Isso é importante na análise de bactérias patogênicas, cujo número depende do grau da doença.
Método bacteriológico de pesquisa, cuja 2ª etapa é estudar colônias individuais de microrganismos, pode ser associado a um método biológico de análise de bactérias. Outro objetivo de trabalhar nesta fase é aumentar a quantidade de material de origem. Isso pode ser feito em um meio nutriente ou você pode realizar um experimento in vivo em organismos experimentais vivos. As bactérias patogênicas se multiplicarão e, como resultado, o sangue conterá milhões de células procarióticas. É fácil preparar o material de trabalho necessário de bactérias a partir do sangue coletado.
Terceira etapa
A parte mais importante do estudo é a determinação das propriedades morfológicas, bioquímicas, toxigênicas e antigênicas da cultura bacteriana. O trabalho é realizado com culturas pré-limpas em meio nutriente, bem como com preparações (muitas vezes coradas) sob um microscópio.
Definir propriedadebactérias patogênicas ou oportunistas a um ou outro grupo sistemático, bem como determinar sua resistência a drogas, permite o método bacteriológico de pesquisa. Etapa 3 - antibióticos, ou seja, análise do comportamento das células bacterianas nas condições do conteúdo dos medicamentos no ambiente.
O estudo da resistência a antibióticos de uma cultura é de grande importância prática quando é necessário prescrever os medicamentos necessários e, principalmente, eficazes para um determinado paciente. É aqui que o método de pesquisa bacteriológica pode ajudar.
O que é um meio de crescimento?
Para desenvolvimento e reprodução, as bactérias devem estar em meios nutrientes pré-preparados. Por consistência, podem ser líquidos ou sólidos, e por origem - vegetal ou animal.
Requisitos básicos de mídia:
1. Esterilidade.
2. Máxima transparência.
3. Indicadores ótimos de acidez, pressão osmótica, atividade de água e outros valores biológicos.
Obtenção de colônias isoladas
1. Método Drygalsky. Consiste no fato de que um esfregaço com vários tipos de microrganismos é aplicado à alça bacteriana. Este loop é passado ao longo da primeira placa de Petri com um meio nutriente. Além disso, sem alterar o loop, o método de material residual é realizado na segunda e terceira placas de Petri. Assim, nas últimas amostras da colônia, as bactérias não serão semeadas muito densamente, simplificando assim a capacidade de encontrar as necessárias para o trabalho.bactérias.
2. Método Koch. Ele usa tubos de ensaio com meio nutriente fundido. Uma alça ou pipeta com um esfregaço de bactérias é colocada lá, após o que o conteúdo do tubo de ensaio é derramado em uma placa especial. O ágar (ou gelatina) solidifica após algum tempo, e é fácil encontrar as colônias de células desejadas em sua espessura. É importante diluir a mistura de bactérias em tubos de ensaio antes de iniciar o trabalho para que a concentração de microrganismos não seja muito alta.
O método bacteriológico de pesquisa, cujas etapas se baseiam no isolamento da cultura de bactérias desejada, não pode prescindir desses dois métodos para encontrar colônias isoladas.
Antibiograma
Visualmente, a reação das bactérias aos medicamentos pode ser vista de duas formas práticas:
1. Método de disco de papel.
2. Reprodução de bactérias e antibióticos em meio líquido.
O método do disco de papel requer uma cultura de microorganismos que foram cultivados em um meio nutriente sólido. Em tal meio, coloque alguns pedaços de papel arredondado embebido em antibióticos. Se a droga lidar com sucesso com a neutralização das células bacterianas, após esse tratamento haverá uma área desprovida de colônias. Se a reação ao antibiótico for negativa, a bactéria sobreviverá.
No caso de utilizar um meio nutriente líquido, primeiro prepare vários tubos de ensaio com uma cultura de bactérias de diferentes diluições. Antibióticos são adicionados a esses tubos de ensaio e o processo de interação entre a substância e os microrganismos é observado durante o dia. Como resultado, obtém-se um antibiograma de alta qualidade, segundo o qual é possíveljulgar a eficácia do medicamento para uma determinada cultura.
Principais tarefas de análise
Aqui lista os objetivos e etapas do método bacteriológico de pesquisa.
1. Obtenha o material de partida que será usado para isolar as colônias bacterianas. Pode ser um esfregaço da superfície de qualquer objeto, membrana mucosa ou cavidade de um órgão humano, um exame de sangue.
2. Cultivo de cultura em meio nutriente sólido. Após 24-48 horas, colônias de diferentes tipos de bactérias podem ser encontradas na placa de Petri. Selecionamos o desejado de acordo com critérios morfológicos e/ou bioquímicos e realizamos outros trabalhos com ele.
3. Propagação da cultura resultante. O método de pesquisa bacteriológica pode ser baseado em um método mecânico ou biológico de aumentar o número de culturas bacterianas. No primeiro caso, o trabalho é realizado com meios nutrientes sólidos ou líquidos, nos quais as bactérias se multiplicam em um termostato e formam novas colônias. O método biológico requer condições naturais para aumentar o número de bactérias, então aqui o animal experimental se infecta com microorganismos. Depois de alguns dias, muitos procariontes podem ser encontrados em uma amostra de sangue ou esfregaço.
4. Trabalhando com cultura purificada. Para determinar a posição sistemática das bactérias, bem como sua pertença a patógenos, é necessário realizar uma análise completa das células de acordo com as características morfológicas e bioquímicas. Ao estudar grupos patogênicos de microrganismos, é importante conhecerquão eficazes são os antibióticos.
Esta era uma característica geral do método de pesquisa bacteriológica.
Características da análise
A regra principal da pesquisa bacteriológica é a máxima esterilidade. Se você estiver trabalhando com tubos de ensaio, culturas e subculturas de bactérias devem ser realizadas apenas sobre uma lâmpada de espírito aquecida.
Todas as etapas do método de pesquisa bacteriológica requerem o uso de uma alça especial ou pipeta Pasteur. Ambas as ferramentas devem ser pré-tratadas na chama de uma lâmpada de álcool. Quanto à pipeta Pasteur, aqui, antes da esterilização térmica, é necessário quebrar a ponta da pipeta com uma pinça.
A técnica de semeadura de bactérias também tem características próprias. Primeiro, ao inocular em meio sólido, uma alça bacteriana é passada sobre a superfície do ágar. A alça, claro, já deve ter uma amostra de microrganismos na superfície. A inoculação no meio de cultura também é praticada, caso em que a alça ou pipeta deve atingir o fundo da placa de Petri.
Ao trabalhar com meios líquidos, são usados tubos de ensaio. Aqui é importante garantir que os líquidos não toquem nas bordas das vidrarias ou rolhas de laboratório e que os instrumentos utilizados (pipeta, alça) não toquem em objetos e superfícies estranhos.
A importância do método de pesquisa biológica
A análise de amostras de bactérias tem suas aplicações práticas. Principalmentemétodo de pesquisa bacteriológica pode ser usado na medicina. Por exemplo, é necessário estudar a microflora do paciente para estabelecer o diagnóstico correto, bem como desenvolver o curso correto do tratamento. Um antibiograma ajuda aqui, que mostrará a atividade das drogas contra o patógeno.
A análise de bactérias é usada em laboratório para detectar doenças perigosas como tuberculose, febre recorrente ou gonorreia. Também é usado para estudar a composição bacteriana das amígdalas, cavidades de órgãos.
O método de pesquisa bacteriológica pode ser usado para determinar a contaminação do meio ambiente. De acordo com os dados sobre a composição quantitativa e qualitativa de um esfregaço da superfície de um objeto, determina-se o grau de população desse ambiente por microrganismos.
