O diagnóstico laboratorial de quase todas as doenças infecciosas é baseado na detecção de anticorpos no sangue do paciente, que são produzidos contra os antígenos do patógeno, pelos métodos de reações sorológicas. Eles entraram na prática médica do final do século XIX ao início do século XX.
O desenvolvimento da ciência ajudou a determinar a estrutura antigênica dos micróbios e as fórmulas químicas de suas toxinas. Isso tornou possível criar não apenas soros terapêuticos, mas também diagnósticos. Eles são obtidos pela administração de patógenos atenuados a animais de laboratório. Após vários dias de exposição, o sangue de coelhos ou camundongos é usado para preparar preparações para identificar micróbios ou suas toxinas por meio de testes sorológicos.
A manifestação externa de tal reação depende das condições de sua configuração e do estado dos antígenos no sangue do paciente. Se as partículas microbianas são insolúveis, elas precipitam, lisam, ligam-se ou imobilizam-se no soro. Se os antígenos são solúveis, então aparece o fenômeno de neutralização ou precipitação.
Reação de aglutinação (RA)
O teste de aglutinação sorológica é altamente específico. É fácil de executar e bastantevisual, para determinar rapidamente a presença de antígenos no soro sanguíneo do paciente. É usado para testar a reação de Vidal (diagnóstico de febre tifóide e paratifóide) e Weigl (febre tifóide).
É baseado em uma interação específica entre anticorpos humanos (ou aglutininas) e células microbianas (aglutenógenos). Após sua interação, formam-se partículas que precipitam. Este é um sinal positivo. Agentes microbianos vivos ou mortos, fungos, protozoários, células sanguíneas e células somáticas podem ser usados para preparar a reação.
Quimicamente, a reação é dividida em duas etapas:
- Conexão específica de anticorpos (AT) com antígenos (AG).
- Não específico - precipitação de conglomerados AG-AT, ou seja, a formação de aglutinante.
Reação de Aglutinação Indireta (IPHA)
Esta reação é mais sensível que a anterior. É usado para diagnosticar doenças causadas por bactérias, parasitas intracelulares e protozoários. É tão específico que até mesmo concentrações muito baixas de anticorpos podem ser detectadas.
Eritrócitos de ovelha purificados e glóbulos vermelhos humanos pré-tratados com anticorpos ou antígenos são usados para sua produção (dependendo do que o técnico de laboratório deseja encontrar). Em alguns casos, os glóbulos vermelhos humanos são tratados com imunoglobulinas. As reações sorológicas dos eritrócitos são consideradas como tendo ocorrido se elas se depositarem no fundo do tubo. Sobre uma reação positivadigamos quando as células estão dispostas na forma de um guarda-chuva invertido, ocupando todo o fundo. Uma reação negativa é contada se os eritrócitos se estabelecerem em uma coluna ou na forma de um botão no centro da parte inferior.
Reação de precipitação (RP)
Reações sorológicas desse tipo são usadas para detectar partículas extremamente pequenas de antígenos. Podem ser, por exemplo, proteínas (ou partes delas), compostos de proteínas com lipídios ou carboidratos, partes de bactérias, suas toxinas.
Os soros para a reação são obtidos pela infecção artificial de animais, geralmente coelhos. Por este método, você pode obter absolutamente qualquer soro precipitante. A configuração das reações de precipitação sorológicas é semelhante em mecanismo de ação às reações de aglutinação. Os anticorpos contidos no soro combinam-se com os antígenos em uma solução coloidal, formando grandes moléculas de proteína que são depositadas no fundo do tubo ou no substrato (gel). Este método é considerado altamente específico e pode detectar até mesmo quantidades insignificantes de uma substância.
Usado para diagnosticar peste, tularemia, antraz, meningite e outras doenças. Além disso, ele está envolvido em um exame médico forense.
Reação de precipitação do gel
As reações sorológicas podem ser realizadas não apenas em meio líquido, mas também em gel de ágar. Isso é chamado de método de precipitação difusa. Com sua ajuda, a composição de misturas antigênicas complexas é estudada. Este método é baseado na quimiotaxia de antígenos para anticorpos e vice-versa. Em um gel eles se movementre si em diferentes velocidades e, encontrando-se, formam linhas de precipitação. Cada linha é um conjunto de AG-AT.
Reação de neutralização de exotoxina com antitoxina (PH)
Os soros antitóxicos são capazes de neutralizar a ação da exotoxina produzida por microrganismos. Essas reações sorológicas são baseadas nisso. A microbiologia usa este método para titular soros, toxinas e toxóides e determinar sua atividade terapêutica. O poder de neutralização da toxina é determinado por unidades convencionais - AE.
Além disso, graças a esta reação, é possível determinar a espécie ou tipo de exotoxina. Isso é usado no diagnóstico de tétano, difteria, botulismo. O estudo pode ser realizado tanto “em vidro” quanto em gel.
Reação de lise (RL)
O soro imunológico, que entra no corpo do paciente, tem, além de sua principal função de imunidade passiva, também propriedades lisantes. É capaz de dissolver agentes microbianos, elementos celulares estranhos e vírus que entram no corpo do paciente. Dependendo da especificidade dos anticorpos incluídos no soro, são isoladas bacteriolisinas, citolisinas, espiroquetolizinas, hemolisinas e outras.
Esses anticorpos específicos são chamados de "complemento". É encontrado em quase todos os fluidos do corpo humano, tem uma estrutura proteica complexa e é extremamente sensível ao aumento de temperatura, agitação, ácidos e luz solar direta. Mas no estado seco é capaz de retersuas propriedades de lise até seis meses.
Existem estes tipos de reações sorológicas deste tipo:
- bacteriólise;
- hemólise.
Bacteriólise é realizada com soro sanguíneo do paciente e soro imunológico específico com micróbios vivos. Se houver complemento suficiente no sangue, o pesquisador verá a bactéria lisar e a reação será considerada positiva.
A segunda reação sorológica do sangue é que uma suspensão das hemácias do paciente é tratada com soro contendo hemolisinas, que são ativadas apenas na presença de um certo complemento. Se houver um, o assistente de laboratório observa a dissolução dos glóbulos vermelhos. Essa reação é amplamente utilizada na medicina moderna para determinar o título de complemento (ou seja, sua menor quantidade que provoca a lise de eritrócitos) no soro sanguíneo e para realizar uma análise para fixação do complemento. É assim que se realiza um teste sorológico para sífilis - a reação de Wasserman.
Reação de fixação do complemento (CFR)
Esta reação é utilizada para detectar anticorpos contra um agente infeccioso no soro sanguíneo do paciente, bem como para identificar o patógeno por sua estrutura antigênica.
Até este ponto, descrevemos reações sorológicas simples. A RSK é considerada uma reação complexa, pois nela interagem não dois, mas três elementos: anticorpo, antígeno e complemento. Sua essência reside no fato de que a interação entre o anticorpo e o antígenoocorre apenas na presença de proteínas do complemento, que são adsorvidas na superfície do complexo AG-AT formado.
Os próprios antígenos, após a adição do complemento, sofrem alterações significativas, que mostram a qualidade da reação. Pode ser lise, hemólise, imobilização, ação bactericida ou bacteriostática.
A reação em si ocorre em duas fases:
- Formação de um complexo antígeno-anticorpo que não é visualmente visível ao examinador.
- Mudança no antígeno sob a ação do complemento. Esta fase geralmente pode ser rastreada a olho nu. Se a reação não for visualmente visível, um sistema indicador adicional é usado para identificar as alterações.
Sistema indicador
Esta reação é baseada na fixação do complemento. Eritrócitos de carneiro purificados e soro hemolítico livre de complemento são adicionados ao tubo de ensaio uma hora após o RSC ser definido. Se um complemento não ligado permanecer no tubo de ensaio, ele se unirá ao complexo AG-AT formado entre as células do sangue de ovelha e a hemolisina, causando sua dissolução. Isso significa que RSK é negativo. Se os eritrócitos permaneceram intactos, então, portanto, a reação é positiva.
Teste de hemaglutinação (RGA)
Existem duas reações de hemaglutinação fundamentalmente diferentes. Um deles é sorológico, é usado para determinar grupos sanguíneos. Neste caso, os glóbulos vermelhos interagem com os anticorpos.
E o segundoa reação não se aplica à sorologia, uma vez que as hemácias reagem com as hemaglutininas produzidas pelos vírus. Como cada patógeno atua apenas em eritrócitos específicos (galinha, cordeiro, macaco), essa reação pode ser considerada altamente específica.
Você pode dizer se uma reação é positiva ou negativa pela localização das células do sangue no fundo do tubo de ensaio. Se o padrão deles se assemelhar a um guarda-chuva invertido, o vírus desejado está presente no sangue do paciente. E se todos os eritrócitos se formaram como uma coluna de moeda, então não há patógenos desejados.
Teste de inibição de hemaglutinação (HITA)
Esta é uma reação altamente específica que permite determinar o tipo, tipo de vírus ou a presença de anticorpos específicos no soro sanguíneo do paciente.
Sua essência reside no fato de que os anticorpos adicionados ao tubo de ensaio com o material de teste impedem a deposição de antígenos nos eritrócitos, interrompendo a hemaglutinação. Este é um sinal qualitativo da presença no sangue de antígenos específicos para o vírus específico que está sendo procurado.
Reação de imunofluorescência (RIF)
A reação é baseada na capacidade de detectar complexos AG-AT com microscopia fluorescente após seu tratamento com corantes fluorocromo. Este método é de fácil manuseio, não requer isolamento de cultura pura e leva pouco tempo. É indispensável para o diagnóstico rápido de doenças infecciosas.
Na prática, essas reações sorológicas são divididas em dois tipos: diretas e indiretas.
Direct RIF é produzido a partir deantígeno, que é pré-tratado com soro fluorescente. E a indireta é que primeiro a droga é tratada com um diagnóstico convencional contendo antígenos para os anticorpos de interesse, e então o soro luminescente, que é específico para as proteínas do complexo AG-AT, é reaplicado, e as células microbianas tornam-se visíveis ao microscópio.
